利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因

李文龙, 冯永永, 李凯彬, 聂湘平. 利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因[J]. 生态毒理学报, 2018, 13(3): 138-145. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171212001
引用本文: 李文龙, 冯永永, 李凯彬, 聂湘平. 利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因[J]. 生态毒理学报, 2018, 13(3): 138-145. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171212001
Li Wenlong, Feng Yongyong, Li Kaibin, Nie Xiangping. Next-generation Knock-out Technology of bco1 and bco1l Genes in Zebrafish by Using CRISPR/Cas9 System[J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2018, 13(3): 138-145. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171212001
Citation: Li Wenlong, Feng Yongyong, Li Kaibin, Nie Xiangping. Next-generation Knock-out Technology of bco1 and bco1l Genes in Zebrafish by Using CRISPR/Cas9 System[J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2018, 13(3): 138-145. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171212001

利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因

    作者简介: 李文龙(1992-),男,硕士研究生,E-mail:535810109@qq.com
  • 基金项目:

    国家科技支撑计划项目:鱼类实验动物新资源的开发与标准化研究(2015BAI09B05)

  • 中图分类号: X171.5

Next-generation Knock-out Technology of bco1 and bco1l Genes in Zebrafish by Using CRISPR/Cas9 System

  • Fund Project:
  • 摘要: β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶(β-carotene-15,15'-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶编码相关的基因bco1bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1bco1l基因2号外显子选取sgRNA识别位点,体外转录制备sgRNA并与 Cas9 mRNA 混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sgRNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。
  • 加载中
  • 加载中
计量
  • 文章访问数:  1472
  • HTML全文浏览数:  1472
  • PDF下载数:  26
  • 施引文献:  0
出版历程
  • 收稿日期:  2017-12-12

利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因

    作者简介: 李文龙(1992-),男,硕士研究生,E-mail:535810109@qq.com
  • 1. 暨南大学生命科学技术学院生态系/水生生物研究中心, 广州 510632;
  • 2. 中国水产科学研究院珠江水产研究所, 广州 510380
基金项目:

国家科技支撑计划项目:鱼类实验动物新资源的开发与标准化研究(2015BAI09B05)

摘要: β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶(β-carotene-15,15'-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶编码相关的基因bco1bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1bco1l基因2号外显子选取sgRNA识别位点,体外转录制备sgRNA并与 Cas9 mRNA 混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sgRNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。

English Abstract

参考文献 (0)

目录

/

返回文章
返回